Для постановки диагноза урогенитального трихомониаза помимо клинических данных необходимо выявление Т. vaginalis. Лабораторная диагностика играет важную роль также при обследовании выздоравливающих и трихомонадоносителей. Заключение об излечении больного может быть сделано лишь на основании трехкратного исследования с отрицательным результатом. Основными методами лабораторной диагностики трихомониаза являются микроскопический и культуральный. Микроскопический метод. У мужчин проводится микроскопическое исследование отделяемого из уретры, центрифугата свежевыпущенной мочи, тотального выжима из придаточных половых желез. При заборе материала необходимо предварительно сухой салфеткой удалить выделения (если они есть) и протереть слизистую головки полового члена тампоном, смоченным в изотоническом растворе хлорида натрия. Соскоб с уретры забирают ложечкой Фолькмана с глубины 5-7 см.
У женщин исследуется отделяемое из уретры, канала шейки матки и осадок мочи. Материал берут ложечкой Фолькмана из уретры на глубине 1-3 см, а также со слизистой заднего свода влагалища и из шейки матки.
В течение суток до взятия материала на исследование женщины не должны делать спринцеваний, а мужчинам следует воздерживаться от мочеиспусканий в течение 3-4 ч до анализа.
Паразитологическая диагностика трихомониаза производится путем изучения нативных мазков, препаратов, окрашенных различными красителями и специальными методами микроскопии.
Нативный мазок. На предметное стекло наносят каплю теплого изотонического раствора хлорида натрия или раствора Рингера-Локка и смешивают с ним исследуемый материал. Мазки накрывают покровным стеклом и микроскопируют немедленно после приготовления препарата (объектив 40х, окуляр 7х или 10х). В положительных случаях в мазках обнаруживаются трихомонады грушевидной, овальной или округлой формы. По величине они несколько больше лейкоцита. Для подвижных форм характерны толчкообразные движения ундулирующей мембраны и жгутиков, которые особенно хорошо видны при исследовании в микроскопе с темнопольным конденсором. Этих простейших необходимо дифференцировать от представителей семейства Bodonidae, имеющих 2 жгутика и очень быстро двигающихся по прямой. К ошибкам может приводить также наличие в препарате подвижных бактерий, которые, прикрепляясь к лейкоцитам, создают иногда ложное впечатление большого количества подвижных трихомонад. При комнатной температуре в изотоническом растворе натрия хлорида трихомонады в течение 2-3 часов теряют подвижность, поэтому исследование необходимо проводить немедленно по поступлении материала.
Для лучшего выявления трихомонад целесообразно производить параллельные исследования нативных мазков и окрашенных препаратов.
Исследуемый материал равномерно наносится тонким слоем на предметные стекла. У женщин материал, взятый из уретры, равномерно размазывают на одной половине стекла в виде продольных полос, а из шейки матки - в виде круга на второй половине стекла. Затем производится окрашивание препаратов.
- Препараты, окрашенные метиленовым синим. Мазок, высушенный на воздухе, фиксируется в течение 3 мин в 96% этиловом спирте, высушивается, затем на него на 1 мин наносится 1 % раствор метиленового синего. Оставшийся краситель смывают под струей холодной воды, мазок высушивают. При микроскопии с иммерсией (объектив 90х, окуляр 7х или 10х) наблюдаются округлой, овальной формы трихомонады, расположенные в слизи между клеточными элементами. Четко просматривается оболочка паразитов, эксцентрично расположенное ядро, интенсивно окрашенное в синий цвет; протоплазма нежная, сетчатая, светлосиняя; вакуоли бесцветные.
- Препараты, окрашенные эозином и метиленовым синим рекомендуется приготовлять при исследовании материала, взятого у детей. Без предварительной фиксации препараты погружают в 1 % раствор зозина на 15-20 с, тщательно промывают струей холодной воды и заливают 1 % раствором метиленового синего на 1-2 мин, затем вновь промывают и высушивают. В этом препарате четко просматривается оболочка трихомонад, ядра их окрашены в синий цвет, а цитотоплазма светло-синяя с легкой сетчатостью; вакуоли бесцветные. Ядра клеток тканей окрашиваются в синий, а протоплазма - в голубой цвет разной интенсивности. Бактериальная флора имеет синий цвет.
- Препараты, окрашенные бриллиантовым зеленым рекомендуется использовать при отсутствии метиленового синего. Препарат фиксируют в течение 3 мин в 96 % этиловом спирте, высушивают, затем на 1 мин. наносят 0,5 % водный раствор бриллиантового зеленого, тщательно смывают краситель струей холодной воды и высушивают. При микроскопии видны урогенитальные трихомонады, расположенные между клеточными элементами. Четко просматривается их оболочка, эксцентрично расположенное ядро, окрашенное в интенсивный зеленый цвет; цитоплазма сетчатая, светло-зеленого цвета, вакуоли бесцветные. Бактериальная флора окрашивается в зеленый цвет разной интенсивности.
- Препараты, окрашенные по модифицированному способу Грама. Препарат покрывают полоской фильтровальной бумаги и заливают 1 % водным раствором кристаллического фиолетового на 1 мин (не должно быть пузырьков воздуха между бумагой и стеклом). Бумагу снимают, препарат промывают водопроводной водой и на несколько секунд (до почернения мазка) заливают раствором Люголя. Остаток его смывают, препарат обесцвечивают в 96 % этиловом спирте, поочередно вынимая и погружая его в спирт до тех пор, пока с тонких участков препарата перестанут стекать фиолетовые струйки и он примет бледно-серый оттенок. Затем препарат промывают водой и окрашивают в течение 3 мин 1 % водным раствором нейтрального красного. После этого препарат вновь промывают и высушивают. Правильно окрашенный препарат при просмотре под микроскопом на тонких участках имеет оранжево-красный цвет, а на толстых - лилово-фиолетовый. Ядра клеточных элементов (лейкоцитов, эпителиальных клеток) в центре имеют фиолетовый, а на периферии - оранжево-красный цвет. Высокое качество окраски обеспечивается своевременным прекращением обесцвечивания препарата. Урогенитальные трихомонады окружены тонкой, четко видимой оболочкой, ядро их сиреневого или фиолетового цвета; протоплазма окрашена в бледный оранжево-красный цвет, с легкой сетчатостью; жгутики и ундулирующая мембрана не просматриваются.
Окрашенные препараты позволяют одновременно диагностировать гонорею и трихомониаз. При просмотре окрашенных мазков необходимо обращать внимание на скопление лейкоцитов на поверхности эпителиальных клеток как вспомогательный признак наличия трихомонад. Этот признак наблюдается довольно часто, но не учитывается врачами-лаборантами, а в руководствах по лабораторным методам исследования о нем практически не сообщается. Еще одним косвенным признаком урогенитального трихомониаза можно также считать наличие большого количества слизи в исследуемом материале. Исследование окрашенных мазков может повышать процент выявления урогенитальных трихомонад за счет учета подвижных и неподвижных особей, в то время как при исследовании нативных препаратов неподвижные особи часто не учитываются. Если в окрашенных мазках наблюдается большое количество сегментоядерных нейтрофилов при незначительном количестве бактериальной флоры, необходимо провести исследование на хламидиоз и микоплазмоз.
- Метод фазово-контрастной микроскопии. Дает возможность обнаруживать живых малоконтрастных урогенитальных трихомонад в неокрашенном виде. Паразиты различимы даже тогда, когда они совсем неподвижны. Метод позволяет с предельной четкостью различать не только движения, но и структуру трихомонад: жгутики, ундулирующую мембрану, аксостиль и др. Для окраски нативных препаратов при фазовоконтрастной микроскопии иногда применяется 0,1 % раствор сафронина. При этой окраске трихомонады сохраняют движения и лучше выделяются среди форменных элементов.
- Метод люминесцентной микроскопии. Метод основан на микроскопии светящегося в ультрафиолетовых лучах объекта в темном поле. Если собственная (первичная) люминесценция материала незначительна, то применяют люминофоры (акридиновый оранжевый и др.), которые, взаимодействуя с объектом, образуют светящиеся комплексы.
Высушенный мазок, взятый для поисков трихомонад, можно длительно хранить в темном месте, а перед исследованием на него необходимо нанести несколько капель раствора акридинового оранжевого (1:40 000 в буферном растворе с рН 7). На мазок с краской накладывают покровное стекло, а избыток жидкости отсасывают фильтровальной бумагой, после чего мазок исследуют под люминесцентным микроскопом. Цитоплазма урогенитальных трихомонад обычно окрашивается в кирпично-красный цвет,а иногда - в желто-коричневый. Ядро овальной формы, светится зеленым или желто-оранжевым цветом. По размеру трихомонады крупнее лейкоцитов, но более мелкие, чем клетки плоского эпителия. При помощи люминесцентной микроскопии удается выявить неподвижные и безжгутиковые формы урогенитальных трихомонад, которые при обычном микроскопировании трудно отличить от лейкоцитов и эпителиальных клеток. Однако необходимо отметить, что у ряда больных в обычном нативном препарате обнаруживают подвижные трихомонады, в то время как при люминесцентной микроскопии они определяются с большим трудом. Сравнительные исследования не показали значительного преимущества люминесцентной микроскопии перед обычной. Тем не менее одновременное использование обоих методов улучшает диагностику трихомонадных заболеваний, особенно у мужчин. Благодаря эксцентрично расположенному зеленоватому ядру и окрашенной в кирпично-красной цвет цитоплазме трихомонад почти невозможно спутать с другими клетками.
При использовании микроскопического метода трихомонады выявляются в большинстве случаев урогенитального трихомониаза. При хронических, процессах и при трихомонадоносительстве, наряду с трихомонадами, обнаруживается разнообразная микрофлора. Необходимо принимать во внимание возможность обнаружения трихомонад в виде атипичных округлых, слабоподвижных и неподвижных форм, иногда без жгутиков и ундулирующей мембраны. У женщин в мазках со слизистой влагалища и шейки матки возможно выявление отдельных ядер трихомонад. Выявление таких ядер и атипичных форм свидетельствует о наличии урогенитального трихомониаза.
Мочеполовой трихомониаз человека относится к группе негонококковых воспалительных заболеваний органов урогенитального тракта. Возбудитель его - урогенитальная трихомонада (Trichomonas vaginalis) относится к тому же семейству Trichomonadidae, что и кишечная трихомонада. Различие между ними заключается в том, что Trichomonas vaginalis имеет более крупные размеры (13,34 - 16,92 мкм), овальное ядро; ундулирующая мембрана ее достигает середины клетки. Размеры же Pentatrichomonas hominis - 7 - 8 мкм, ядро круглое, ундулирующая мембрана доходит до конца клетки, а далее продолжается свободная часть жгутика. Trichomonas vaginalis отличается полиморфизмом. Типичной является наиболее подвижная грушевидная форма, но чаще, особенно после этиотропной терапии, встречаются округлые и овальные, неподвижные или слабоподвижные формы, лишенные жгутиков и ундулирующей мембраны, что в значительной степени затрудняет паразитологическую диагностику.
Заражение мочеполовым трихомониазом происходит при половом контакте с больным трихомониазом или носителем трихомонад. Трихомонады, попадая в уретру и цервикальный канал, постепенно распространяются по поверхности слизистых оболочек, затем проникают в субэпителиальную соединительную ткань, что приводит к развитию воспалительных реакций. Трихомонады поражают лимфатические сосуды, придаточные половые железы у мужчин, придатки у женщин, вызывая в них воспалительные процессы. Нередко встречаются микст-инвазии с другими возбудителями заболеваний мочеполовой системы (Neisseria gonorrhоeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Candida albicans и др.). Установлено, что при микст-инвазиях Т. vaginalis cпособны фагоцитировать гонококки, хламидии и другие микроорганизмы, которые могут в них сохранять жизнеспособность, становясь недоступными для антибиотиков. В связи с этим при лизисе трихомонад под действием противопротозойных препаратов эти микроорганизмы освобождаются из их клеток, что может способствовать поддержанию хронического воспалительного процесса в органах урогенитального тракта.
Культуральный метод. Применяется в случаях атипичной клинической картины, при хроническом течении заболевания, выявлении трихомонадоносителей и для установления выздоровления больных.
Для культивирования трихомонад используется большое количество жидких и плотных питательных сред.
