Диагностика по окрашенным препаратам имеет свои ограничения, так как для T.vaginalis не всегда характерна классическая форма со жгутиками. Часто простейшее имеет округлую форму, может напоминать лейкоциты с полиморфным ядром или эпителиальные клетки.
Другой, давно и с успехом используемой методологией является - культуральное (бактериологическое) исследование, считающееся «золотым стандартом». Культуральному методу изучения T.vaginalis. посвящены обстоятельные работы отечественных ученых (Васильев М.М., Беднова В.Н., 1980; Беднова В.Н.. Васильев М.М., 1982, 1985; Васильев М.М., 1990; ГасановаТ.А., 2002).
Результаты культурального исследования легко интерпретируются. Для диагностики требуется всего лишь от 300 до 500 трихомонад в 1 мл инокулята (Беднова В.Н., Васильев М.М., 1985; Беднова В.Н. с соавт., 1981; Васильев М.М., 1990; Garber G.C., Lemchuk -Faval L.T., 1994).
Существуют, однако, внутренне обусловленные ограничения использования культуральной технологии. Главным является временной фактор. Для проведения культурального исследования требуется наличие в лаборатории отделения бактериологии, качественных питательных сред, что является также значительной проблемой, соответствующей квалификации медицинского персонала и соблюдения правил взятия материала и его культивирования. При этом важно не только соблюсти «посевную дозу», но и правильно «вести» культуру. Установленные ЦКВИ сроки просмотра культуры на 3-5, 7-9, 11-17 день культивирования (Пособие для врачей «Лабораторная диагностика мочеполового трихомониаза», 1997) вряд ли можно считать сегодня законодательными (неизменными), поскольку нередко удается обнаружить влагалищные трихомонады уже через 24 часа культивирования, а через 48, 96 часов особи могут потерять подвижность, округлиться, увеличиться в размере, а, следовательно, в нативном препарате уже не могут быть идентифицированы по характерным морфологическим признакам: наличию типичных толчкообразных, медленных движений с выбрасыванием жгутиков и характерным движением ундулирующей мембраны. В то же время, при культивировании материала из прямой кишки, Т. vaginalis могут быть выявлены и в более поздние сроки (на 10-14 день от момента посева).
Инкубационный период заболевания длится 2-7 дней и более и все это время больные продолжают являться источником инфекции. Кроме того, метод довольно дорог, а культуральные системы и условия культивирования часто не приемлемы в клинических условиях, особенно в частных клиниках (Сосновцева О.П, Софьин B.C., 1999; Moldwin R.M., 1992). С целью расширения возможностей использования культурального метода в клинической практике, была разработана технология пластиковых пакетов, которая сочетает в себе технику нативного препарата и микрокультуры. Описана также разновидность метода пластикового пакета — система «в мешке» (inPouch), представляющая собой пакет с двумя отделениями, который позволяет немедленно приготовить нативный препарат для непосредственного микроскопирования в пластике. Дмитриев Г.А. (2003), Levi M.H. etal. (1996) установили, что система «в мешке», по крайней мере также чувствительна как и среда Diamond's, а по данным Borchart V.L. etal. (1996) — намного более чувствительна, чем питательная среда «Трихозел».
Для диагностики мочеполового трихомониаза предложена также среда Добелла-Лейдлоу. Недостатками среды являются: необходимость приготовления ее ехtempero, потребность в тщательном взятии материала, недостаточность отдельных компонентов среды, в частности, мясопептонного бульона, сложности культивирования при посеве материала с кровью.
Garber G.E., Lemchuk - Faval L.T. (1994) использовали клетки Мак Коя для культивирования Т. vaginalis и показали, что эта методика превосходит по чувствительности культивирование на бульоне, и позволяет выявить — Т. vaginalis при такой низкой концентрации как 3-5 клеток в 1 мл инокулята. Клеточную культуру, однако, в обычных условиях не используют, так как это дорого и неприемлемо для экспресс-диагностики.
Важным моментом лабораторной диагностики трихомониаза является определение чувствительности Т. vaginalis к протистоцидным препаратам. В силу того, что рост трихомонад осуществляется на жидкой питательной среде, эта процедура заключается, главным образом, в титровании. Методология подробно описана, однако используется преимущественно в рамках научных исследований для разработки новых методов лечения. Проблема заключается не в том, чтобы выделить чистую культуру трихомонад и определить ее чувствительность к лекарственным препаратам, а в том, что в нашем распоряжении имеется лишь одна группа протистоцидных средств - производные 5-нитроимидазо-лов (метронидазол, секнидазол и др.). В случае установления низкой чувствительности (резистентность) штамма Т. vaginalis, у клинициста практически нет другого выхода как назначение (эмпирически) более высокой дозы препарата (Абдумаликов Р.А., 1995), что не всегда приводит к положительному лечебному эффекту. Следует отметить, что определение чувствительности возбудителя мочеполового трихомониаза осуществляется на практике крайне редко и мы, фактически, не имеем достоверных сведений о количестве "резистентных" штаммов Т.vaginalis в различных регионах России как, например, в случае с гонококковой инфекцией.
За последние годы на российском рынке появилось значительное количество питательных сред отечественных и зарубежных производителей для культуральной диагностики трихомониаза (Дмитриев Г.А., 2003). Вместе с тем, в силу ряда обстоятельств культуральная диагностика урогенитального трихомониаза осуществляется далеко не во всех ЛПУ и это связано с рядом обстоятельств:
- техническими, материальными, организационными возможностями (наличие ламинаров (боксов), лабораторной посуды, инструментария и другого оборудования);
- наличием квалифицированного персонала, в том числе клиницистов, осуществляющих забор материала;
- соблюдение стерильности, поточности и других норм, предписанных СЭН для выполнения подобных исследований.
Еще одним обстоятельством, препятствующим широкому применению культуральной диагностики мочеполового трихомониаза, является ее длительность, что вступает в определенное противоречие с необходимостью наиболее раннего выявления и санирования ИППП. Вместе с тем, в ряде зарубежных стран (Англия и другие) имеется многолетняя практика одновременного микроскопического и культурального исследования при клинико-лабораторном обследовании пациента с подозрением на ИППП. Считаем это оправданным, так как исключается повторное обращение к врачу, дополнительный забор материала, что в целом повышает качество диагностики и сокращает сроки обследования.
Таким образом, культуральная диагностика мочеполового трихомониаза отнюдь не утратила своей актуальности и в комплексе с микроскопическими исследованиями должна, на наш взгляд, широко использоваться в клинической практике и научно — практических исследованиях, в частности, для разработки новых схем воздействия на Т. vaginalisпротистоцидными средствами.
Более подробно методология микроскопии и культуральной диагностики трихомониаза освещены в действующих Приказах МЗ СССР № 936 и № 1570, методических рекомендациях, пособиях для врачей, а также монографии "Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций" (Г.А. Дмитриев, 2003).
