Культуральний метод дослідження при сечостатевому трихомоніазі

Диагностика по окрашенным препаратам имеет свои ограничения, так как для T.vaginalis не всегда характерна классическая форма со жгутиками. Часто простейшее имеет округлую форму, может напоминать лейкоциты с полиморфным ядром или эпителиальные клетки.

Другой, давно и с успехом используемой методологией является - культуральное (бактериологическое) исследование, считающееся «золотым стандартом». Культуральному методу изучения T.vaginalis. посвящены обстоятельные работы отечественных ученых (Васильев М.М., Беднова В.Н., 1980; Беднова В.Н.. Васильев М.М., 1982, 1985; Васильев М.М., 1990; ГасановаТ.А., 2002).

Результаты культурального исследования легко интерпретируются. Для диагностики требуется всего лишь от 300 до 500 трихомонад в 1 мл инокулята (Беднова В.Н., Васильев М.М., 1985; Беднова В.Н. с соавт., 1981; Васильев М.М., 1990; Garber G.C., Lemchuk -Faval L.T., 1994).

Существуют, однако, внутренне обусловленные ограничения использования культуральной технологии. Главным является временной фактор. Для проведения культурального исследования требуется наличие в лаборатории отделения бактериологии, качественных питательных сред, что является также значительной проблемой, соответствующей квалификации медицинского персонала и соблюдения правил взятия материала и его культивирования. При этом важно не только соблюсти «посевную дозу», но и правильно «вести» культуру. Установленные ЦКВИ сроки просмотра культуры на 3-5, 7-9, 11-17 день культивирования (Пособие для врачей «Лабораторная диагностика мочеполового трихомониаза», 1997) вряд ли можно считать сегодня законодательными (неизменными), поскольку нередко удается обнаружить влагалищные трихомонады уже через 24 часа культивирования, а через 48, 96 часов особи могут потерять подвижность, округлиться, увеличиться в размере, а, следовательно, в нативном препарате уже не могут быть идентифицированы по характерным морфологическим признакам: наличию типичных толчкообразных, медленных движений с выбрасыванием жгутиков и характерным движением ундулирующей мембраны. В то же время, при культивировании материала из прямой кишки, Т. vaginalis могут быть выявлены и в более поздние сроки (на 10-14 день от момента посева).

Инкубационный период заболевания длится 2-7 дней и более и все это время больные продолжают являться источником инфекции. Кроме того, метод довольно дорог, а культуральные системы и условия культивирования часто не приемлемы в клинических условиях, особенно в частных клиниках (Сосновцева О.П, Софьин B.C., 1999; Moldwin R.M., 1992). С целью расширения возможностей использования культурального метода в клинической практике, была разработана технология пластиковых пакетов, которая сочетает в себе технику нативного препарата и микрокультуры. Описана также разновидность метода пластикового пакета — система «в мешке» (inPouch), представляющая собой пакет с двумя отделениями, который позволяет немедленно приготовить нативный препарат для непосредственного микроскопирования в пластике. Дмитриев Г.А. (2003), Levi M.H. etal. (1996) установили, что система «в мешке», по крайней мере также чувствительна как и среда Diamond's, а по данным Borchart V.L. etal. (1996) — намного более чувствительна, чем питательная среда «Трихозел».

Для диагностики мочеполового трихомониаза предложена также среда Добелла-Лейдлоу. Недостатками среды являются: необходимость приготовления ее ехtempero, потребность в тщательном взятии материала, недостаточность отдельных компонентов среды, в частности, мясопептонного бульона, сложности культивирования при посеве материала с кровью.

Garber G.E., Lemchuk - Faval L.T. (1994) использовали клетки Мак Коя для культивирования Т. vaginalis и показали, что эта методика превосходит по чувствительности культивирование на бульоне, и позволяет выявить — Т. vaginalis при такой низкой концентрации как 3-5 клеток в 1 мл инокулята. Клеточную культуру, однако, в обычных условиях не используют, так как это дорого и неприемлемо для экспресс-диагностики.

Важным моментом лабораторной диагностики трихомониаза является определение чувствительности Т. vaginalis к протистоцидным препаратам. В силу того, что рост трихомонад осуществляется на жидкой питательной среде, эта процедура заключается, главным образом, в титровании. Методология подробно описана, однако используется преимущественно в рамках научных исследований для разработки новых методов лечения. Проблема заключается не в том, чтобы выделить чистую культуру трихомонад и определить ее чувствительность к лекарственным препаратам, а в том, что в нашем распоряжении имеется лишь одна группа протистоцидных средств - производные 5-нитроимидазо-лов (метронидазол, секнидазол и др.). В случае установления низкой чувствительности (резистентность) штамма Т. vaginalis, у клинициста практически нет другого выхода как назначение (эмпирически) более высокой дозы препарата (Абдумаликов Р.А., 1995), что не всегда приводит к положительному лечебному эффекту. Следует отметить, что определение чувствительности возбудителя мочеполового трихомониаза осуществляется на практике крайне редко и мы, фактически, не имеем достоверных сведений о количестве "резистентных" штаммов Т.vaginalis в различных регионах России как, например, в случае с гонококковой инфекцией.

За последние годы на российском рынке появилось значительное количество питательных сред отечественных и зарубежных производителей для культуральной диагностики трихомониаза (Дмитриев Г.А., 2003). Вместе с тем, в силу ряда обстоятельств культуральная диагностика урогенитального трихомониаза осуществляется далеко не во всех ЛПУ и это связано с рядом обстоятельств:

  • техническими, материальными, организационными возможностями (наличие ламинаров (боксов), лабораторной посуды, инструментария и другого оборудования);
  • наличием квалифицированного персонала, в том числе клиницистов, осуществляющих забор материала;
  • соблюдение стерильности, поточности и других норм, предписанных СЭН для выполнения подобных исследований.

Еще одним обстоятельством, препятствующим широкому применению культуральной диагностики мочеполового трихомониаза, является ее длительность, что вступает в определенное противоречие с необходимостью наиболее раннего выявления и санирования ИППП. Вместе с тем, в ряде зарубежных стран (Англия и другие) имеется многолетняя практика одновременного микроскопического и культурального исследования при клинико-лабораторном обследовании пациента с подозрением на ИППП. Считаем это оправданным, так как исключается повторное обращение к врачу, дополнительный забор материала, что в целом повышает качество диагностики и сокращает сроки обследования.

Таким образом, культуральная диагностика мочеполового трихомониаза отнюдь не утратила своей актуальности и в комплексе с микроскопическими исследованиями должна, на наш взгляд, широко использоваться в клинической практике и научно — практических исследованиях, в частности, для разработки новых схем воздействия на Т. vaginalisпротистоцидными средствами.

Более подробно методология микроскопии и культуральной диагностики трихомониаза освещены в действующих Приказах МЗ СССР № 936 и № 1570, методических рекомендациях, пособиях для врачей, а также монографии "Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций" (Г.А. Дмитриев, 2003).

Інші статті